HGH fragment voix oral ?

[jonas]

L'invention concerne des produits alimentaires et des boissons qui sont utiles dans le contrôle de l'obésité. L'aliment ou la boisson comprend ou est constitué par une plante transgénique ou parties de ceux-ci comprenant une molécule d'acide nucléique, la molécule d'acide nucléique codant pour un fragment C-terminal de l'hormone de croissance qui est capable de moduler le métabolisme des lipides. La plante transgénique peut être utilisé dans la production d'un produit fermenté aliment ou une boisson, ou peut être une partie d'un végétal comestible, tel qu'un fruit ou un légume, y compris, mais sans s'y limiter, la tomate, la banane, la pomme de terre et.

Description de l'invention

CONTEXTE DE L'INVENTION

Dans le brevet australien n ° 693 478 (brevet US. N ° 5869452) par l'Université Monash, nous avons décrit l'utilisation d'un peptide dérivé de la séquence carboxy-terminale de l'hormone de croissance humaine, ou les régions correspondantes de l'hormone de croissance d'autres espèces de mammifères, pour la contrôle de l'obésité. Cette région de l'hormone de croissance a la capacité de moduler le métabolisme des lipides. En particulier, un peptide synthétique correspondant aux résidus d'acides aminés 177 191 de la séquence hormone de croissance humaine (ci-après dénommé hGH 177 191) a été trouvé pour réduire le gain de poids corporel et la masse du tissu adipeux dans un système modèle pour l'obésité, le C57B1/6J (Ob / Ob) de la souris. Une demande ultérieure, PCT/AU98/00724 (brevet US. N ° 6737407) par métaboliques Pharmaceuticals Ltd, divulgue des analogues du peptide hGH177 191 qui partagent cette activité. Dont la description complète du brevet US. N ° 5869452 et (brevet US. N ° 6737407) sont incorporés ici par référence. Toutes les études décrites dans les deux spécifications antérieures ont été effectuées avec l'administration du peptide par injection.

Notre découverte ultérieure que ces peptides sont actifs par voie orale, ne possèdent pas de toxicité connue à n'importe quelle dose, et peuvent être administrés efficacement à des fréquences allant de une fois tous les quelques jours de permanence a conduit à l'idée que, contre-intuitivement, un aliment gras réductrice, boissons, ou additif alimentaire ne peut être produit. En particulier, le peptide peut être exprimée directement par les micro-organismes qui sont utilisés dans la production de produits alimentaires, tels que les micro-organismes de fermentation utilisés dans la production de boissons comme la bière, le vin et le cidre, produits laitiers fermentés tels que les yaourts et Buttermilks, aliments probiotiques, ou les produits carnés fermentés, comme le salami et produits de boulangerie comme les pains, y compris les pains au levain. Le peptide peut également être exprimée dans les plantes de fruits et légumes, comme les bananes, les tomates, les pommes de terre ou.

La reconnaissance par les inventeurs est que les caractéristiques mentionnées ci-dessus des peptides rendre possible la mise à disposition du fragment d'hormone de croissance dans un aliment ou une boisson par des méthodes de recombinaison d'ADN, fournissant ainsi une source fiable de quantités suffisantes de le fragment d'hormone de croissance dans un pratique, forme peu coûteuse pour une utilisation dans diverses applications thérapeutiques et prophylactiques ou dans l'amélioration de la qualité de la viande, sans la nécessité de procédures de purification coûteuses. Compte tenu des propriétés avantageuses biologiques du fragment de l'hormone de croissance, des organismes recombinants exprimant le fragment d'hormone de croissance sont particulièrement utiles dans une variété de circonstances où il est nécessaire ou souhaitable de maintenir le contrôle du poids ou de l'utilisation des aliments.

RESUME DE L'INVENTION

Selon un premier aspect, l'invention concerne un organisme recombinant, comprenant une molécule d'acide nucléique exogène qui code pour une hormone de croissance polypeptidiques ayant des propriétés améliorées en modulant le métabolisme des lipides,

avec la condition que la molécule d'acide nucléique exogène ne code pas pour une intact, sur toute la longueur hormone de croissance de mammifère.

Aux fins de cette spécification, le terme "fragment d'hormone de croissance" ou "polypeptide hormone de croissance" doit être compris comme signifiant un fragment de polypeptide de la région carboxy-terminale de la séquence d'acides aminés d'une hormone de croissance chez les mammifères, qui a une ou plusieurs des activités biologiques suivantes:

(A) la capacité de réduire le gain de poids corporel et de la masse du tissu adipeux chez un mammifère homologues,

( B ) la capacité à réduire l'activité de la lipogenèse, et

© la capacité à stimuler la lipolyse.

De préférence, le fragment d'hormone de croissance a la capacité de stimuler l'activité de la lipase hormono-sensible, une enzyme clé dans la lipolyse, et pour inhiber l'acétyl CoA carboxylase, une enzyme clé dans la lipogénèse.

De préférence, le fragment d'hormone de croissance comprend au moins la boucle disulfure lié d'une hormone de croissance de mammifère.

Le terme "fragment d'hormone de croissance" englobe également les peptides qui sont des analogues des natifs carboxy-terminaux des séquences de l'hormone de croissance de mammifère, pour autant que l'analogue garde une ou plusieurs des activités biologiques mentionnés ci-dessus. Ces analogues peuvent être dérivés de sources naturelles, produites par génie génétique, ou synthétisés en utilisant des peptides synthétiques méthodes. Ces peptides synthétiques méthodes doivent être compris comme incluant des méthodes combinatoires. De préférence de tels analogues comprennent une liaison disulfure qui confère une configuration cyclique sur le peptide. En particulier, tous les peptides décrits dans PCT/AU98/00724 (brevet US. N ° 6737407) doivent être compris comme relevant de la portée de cette invention. Ces peptides comprennent ceux qui sont énoncées dans les présentes comme SEQ ID NO: 20 40.

De préférence, le segment d'acide nucléique premier code pour les aminoacides 182 189 (182 189 hGH), de préférence les acides aminés 177 191 de l'hormone de croissance humaine (hGH 177 191). Cependant, il est bien entendu que l'invention est également applicable à des fragments d'hormone de croissance dérivés de l'hormone de croissance d'autres espèces de mammifères, y compris mais non limité à ceux des mammifères domestiques tels que les bovins, les moutons, les porcs et les chevaux, les animaux de compagnie tels que les chats et les chiens, y compris les animaux de zoo et les félidés, les canidés et les primates non humains. Il ya une forte conservation de la séquence de cette région de l'hormone de croissance entre les espèces, tel qu'énoncé dans PCT/AU98/00724 (brevet US. N ° 6737407) et les références qui y sont citées.

Où un partenaire de fusion est utilisé, ce sera de préférence une séquence signal pour un polypeptide sécrété ou une protéine, et de préférence comprend un site de clivage de protéase spécifique entre le partenaire de fusion et le fragment d'hormone de croissance. Lorsque l'étiquette d'épitope est utilisé, ce qui facilite l'isolement du fragment d'hormone de croissance de l'organisme.

Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une cellule hôte transformée avec une molécule d'acide nucléique selon l'invention. La cellule hôte peut être un micro-organisme utilisé dans la production d'un produit fermenté aliment ou une boisson, ou peut être une cellule d'une plante comestible, tel qu'un fruit ou un légume, y compris, mais sans s'y limiter, la tomate, la banane, la pomme de terre et. En variante, la cellule hôte peut être une cellule d'un animal transgénique mammifère non humain, par exemple une vache, un mouton ou une chèvre, qui sécrète l'hormone de croissance fragment dans son lait.

Les molécules d'acide nucléique de l'invention peuvent être exprimés dans des cellules végétales. En exprimant la molécule d'acide nucléique de l'invention dans des plantes, la protéine exprimée peut en principe être située à n'importe quel compartiment désirée à l'intérieur de la cellule végétale. Afin de localiser la protéine dans un compartiment spécifique, la région codante est éventuellement liée à des séquences d'ADN qui assurent la localisation dans le compartiment désiré. De telles séquences sont connues, voir par exemple Braun et al, EMBO J. 11 (1992), 3219 3227;. Wolter et al, Proc.. Natl. Acad. Sci. USA 85 (1988), 846 850; Sonnewald et al, Plant J. 1 (1991), 95 106..

Ainsi, l'invention concerne également des cellules végétales transgéniques transformées génétiquement modifié et avec une molécule d'acide nucléique de l'invention, ainsi que les cellules végétales transgéniques qui sont dérivés de cellules transformées de telle manière. De telles cellules comprennent une molécule d'acide nucléique de l'invention, qui est de préférence lié à un ou plusieurs éléments d'ADN régulateurs qui assurent la transcription dans des cellules végétales, de préférence l'élément de régulation est un promoteur.

Les cellules de plantes transgéniques peut être régénérées en plantes entières, à l'aide des méthodes connues de l'homme de l'art. Ainsi les plantes obtenues par régénération des cellules végétales transgéniques selon l'invention et les plantes contenant les cellules de plante transgénique selon l'invention sont également dans le cadre de la présente invention. Les plantes transgéniques peuvent en principe être des plantes de toutes les espèces désirées, c'est à dire qu'ils peuvent être monocotylédone ainsi que des plantes dicotylédones. Ils sont de préférence des plantes comestibles, en particulier de l'amidon ou de l'amidon synthèse de stockage de plantes telles que les céréales, y compris le seigle, l'orge, l'avoine, le blé, le riz, etc maïs, les pois, le manioc, les pommes de terre, des fruits comme la banane, ou de légumes comme tomate. Les plantes utilisées comme aliments pour animaux, que ce soit avec ou sans transformation préalable, peuvent également être utilisés. Ces plantes de canola, ce qui est largement utilisé dans la forme de tourteau de canola.

L'invention concerne également des matériels de multiplication des plantes de l'invention, tels que les fruits, les graines, les tubercules, les porte-greffes, semis, boutures, etc

Il a été montré que l'expression des protéines dans les plantes peut être améliorée de façon différentielle dans le nectar en utilisant un promoteur spécifique nectaire, et que les abeilles se nourrissent du nectar peut passer la protéine non digérée dans le miel (New Scientist le 26 juin 1999). Ainsi, l'invention s'étend également au miel produit à partir de plantes exprimant le fragment d'hormone de croissance de l'invention.

Où la cellule hôte est un micro-organisme, de préférence le micro-organisme sécrète le fragment d'hormone de croissance dans le milieu de croissance.

Dans une forme de réalisation préférée, la cellule hôte est une levure, de préférence une levure d'un genre tel que Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Kluyveromyces ou analogue, de préférence Saccharomyces cerevisiae ou Pichia pastoris. Lorsque la levure Saccharomyces cerevisiae est, il peut être d'une souche adaptée à la production de la bière, du vin ou du pain.

Dans un deuxième mode de réalisation préféré, la cellule hôte est une bactérie d'acide lactique ou d'un organisme probiotique. La bactérie d'acide lactique peut être du type de fermentation homolactique ou hétérolactique.

Dans ce mode de réalisation de la cellule hôte est de préférence choisi dans le groupe constitué par:

Espèces de Lactobacillus acidophilus, comme, brevis, bulgaricus, buchneri, casei, confusus, cucumeris, curvatis, delbrueckii, farciminis, fermentum, fructivorans, helveticus, hilgardii, lactis, leichmanii, lotus, pasterianus, plantarum, reuteri, pentoaceticus, plantarum et le saké ;

Bifidobacterium bifidum, tels que, longum, et breve;

Espèces Leuconostoc, comme cremoris, mesenteroides et var mesenteroides. l'amour;

Espèces Micrococcus;

Espèce Pediococcus cerevisiae, tels que, halophilus, homari, pentosaceus et soyae;

Espèces Propionibacterium, comme shermani;

Acetobacter espèces, comme rancens et xylium;

Espèces de Bacillus, comme brassicae fermentati, citreus, laterosporus, licheniformis, le natto et pumillus;

Espèces de Clostridium, comme bifermentans;

Espèces de Corynebacterium, comme Kusaya,

Halobacterium espèces,

Halococcus espèces,

Staphylococcus aureus et Staphylococcus epidermidis, et

Espèces du genre Streptococcus, comme cremoris, lactis, lactis var. diacetylactis, lactis var. faecalis hollandicus et thermophilus.

Encore plus de préférence la cellule hôte est choisie dans le groupe constitué par Lactobacillus brevis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus farciminis, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus fructivorans, Lactobacillus leichmanii, Lactobacillus pasteurianus, Lactobacillus plantarum, Propionibacterium shermani, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve, et Leuconostoc cremoris.

L'homme de l'art sera conscient du fait que, bien que certains de ces organismes, tels que Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus et Staphylococcus epidermidis, sont des agents pathogènes dans certaines situations, ces organismes ne doivent souches qui sont utilisées dans l'industrie alimentaire.

Selon un troisième aspect, l'invention concerne un procédé de production d'un produit fermenté aliment ou une boisson, comprenant l'étape consistant à utiliser une culture de départ de l'invention. De préférence, le produit alimentaire est cuit marchandises (si le fragment d'hormone de croissance est stable à la chaleur), le fromage, le yaourt, un produit alimentaire fermenté, ou un aliment probiotique. De préférence la boisson est une bière, un vin ou un cidre. Cependant, la culture de l'invention peuvent également être ajoutés à des produits tels que les jus de fruits ou des boissons, jus de légumes, ou des boissons gazeuses.

Dans un quatrième aspect, l'invention concerne un produit alimentaire ou d'une boisson produite par ou dérivé d'une cellule ou d'un organisme transformé selon l'invention. La nature du produit alimentaire dépendra bien sûr de la nature de l'hôte d'expression.

Il est bien entendu que l'invention couvre également les produits alimentaires ou de boissons qui ne sont pas eux-mêmes génétiquement modifiées, mais qui comprennent un fragment d'hormone de croissance tel que défini ci-dessus. Ainsi, dans un cinquième aspect de l'invention concerne un additif alimentaire, une boisson ou un aliment comprenant un fragment d'hormone de croissance qui est capable de moduler le métabolisme des lipides.

Dans un sixième aspect, l'invention concerne un procédé choisi dans le groupe constitué par

(A) un gain de poids de contrôle,

( B ) la modification gras / maigre rapport,

© modifier le métabolisme des lipides, et

(D) la modification de l'utilisation des aliments,

comprenant l'étape d'administration d'un produit alimentaire ou d'une boisson selon l'invention en tant que partie de l'alimentation d'un mammifère ayant besoin d'un tel traitement. Dans un mode de réalisation préféré, cet aspect de l'invention fournit un procédé pour améliorer le ratio gras / maigre chez le bétail élevé pour la production de viande.

Il sera bien entendu que le procédé de l'invention peut être utilisé en conjonction avec un ou plusieurs autres méthodes de paiement, y compris mais non limité à une restriction alimentaire ou la modification, les schémas d'exercice, et l'administration des autres modificateurs du métabolisme des lipides.

Les procédés de l'invention sont applicables non seulement aux humains, mais aussi pour les mammifères domestiques tels que les bovins, les moutons, les porcs et les chevaux, les animaux de compagnie tels que les chats et les chiens et les animaux de zoo, y compris les félidés, les canidés et les primates non humains. En particulier, il convient de noter que les animaux domestiques utilisés pour la production de viande, le contrôle de l'utilisation des aliments de façon à maximiser la masse maigre est généralement considérée comme souhaitable.

Bien que l'invention est plus particulièrement décrite en référence à levures, il sera bien entendu que le procédé de l'invention est applicable à une large gamme de micro-organismes, y compris les organismes utilisés dans le fromage, le yaourt et le babeurre cultures starter, organismes utilisés dans la fermentation malolactique, et organismes utilisés dans la production de produits alimentaires fermentés comme la sauce de soja, le kimchi, et la choucroute.

Aux fins de cette spécification, il sera bien entendu que le mot «comprenant» signifie «y compris, mais sans s'y limiter», et que le mot «comprend» a un sens correspondant.

Le terme «obésité» doit être compris comme incluant à la fois l'excès de poids et l'excès de masse adipeuse chez le mammifère, et donc des références à traitement de l'obésité incluent des traitements destinés à entraîner une réduction du gain de poids et / ou la réduction du tissu adipeux masse du mammifère obèse. Généralement à la fois une réduction du gain de poids et la réduction de la masse du tissu adipeux sont souhaitées. Ainsi, le résultat attendu d'un traitement de l'obésité est la réduction du poids corporel global et la réduction de masse de tissu adipeux dans le corps. Masse de tissu adipeux est directement régie par les processus de lipogenèse (production de matières grasses) et la lipolyse (réduction de la graisse). Il est généralement admis que ces processus biochimiques sont contrôlés par des enzymes métaboliques clés. L'enzyme clé de la lipogenèse est l'acétyl CoA carboxylase, et l'enzyme clé de la lipolyse est lipase hormono-sensible.

Selon la revendication 1 de 18 revendications

1. Une plante transgénique comprenant une première molécule d'acide nucléique exogène codant pour un peptide correspondant à un fragment d'hormone de croissance de mammifère et comprenant un pont disulfure, où ledit peptide comprend les résidus d'acides aminés 177 191 de l'hormone de croissance humaine, (acides aminés 2 16 de la SEQ ID NO : 9), un sous-fragment de celui-ci, ou un de ses analogues, dans lequel l'analogue varie de pas plus de trois positions de SEQ ID NO: 9 et dans lequel l'analogue contient une arginine à la position correspondant à la position 3 de SEQ ID NO: 9, et dans lequel l'analogue contient un acide glutamique à la position correspondant à la position 11 de SEQ ID NO: 9, à condition que tout analogue n'est pas intact, l'hormone de croissance polypeptide de pleine longueur, et dans laquelle le peptide, sous-fragment ou analogue est actif par voie orale et a la capacité d'augmenter ou de diminuer la lipolyse lipogenèse chez un mammifère auquel la plante transgénique ou une partie de celui-ci ou le produit est administré par voie orale.

source : http://www.pharmcast...esity082906.htm